本文介绍了一款基于探针法荧光定量PCR原理的检测试剂盒，旨在满足生物医疗领域的需求，尤其是疾病检测和基因分析。该产品具备以下显著特点：

产品特点

1. 即开即用：用户只需提供样品DNA模板，无需复杂的前期准备。

2. 优化组分：经过精细优化的引物等组分，确保试剂盒具备高灵敏度，能够准确检测低丰度的DNA样本。

3. 阳性对照提供：提供阳性对照，便于实验者区分假阴性样品，提高检测的可靠性。

4. 高特异性：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，有效避免与其他生物样本的交叉反应。

5. 定性与定量检测：该试剂盒同时支持定性和定量检测，定量检测时的线性范围至少为五个数量级。

6. 足量反应：产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应，适合大规模实验需求。

7. 科研专用：本试剂盒仅供科研用途，不适用于临床诊断。

实验操作步骤

一、DNA提取

用户可以自选方法提取纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容性良好。

二、稀释标准曲线样品

由于阳性对照浓度较高，稀释操作需在独立区域进行，以避免样品或试剂盒其他成分的污染。

将6个离心管标记为7，6，5，4，3，2，并依次向其中加入45μL的DEPC-H2O。利用正确定量的阳性对照进行逐步稀释，获得所需浓度的标准曲线样品。

三、试剂配制

根据待检样品数量准备相应的qPCR管，并添加必要的试剂成分。详见使用说明书以获取具体配制信息。

四、添加模板

向每个qPCR管中添加2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及阳性对照，离心30秒后进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放置于PCR扩增仪器中，并按照说明书中的扩增程序进行操作，确保反应顺利进行。

六、结果分析

如果制作标准曲线，以阳性对照浓度的对数值为横轴，Ct值为纵轴绘制曲线，并通过推算得出样品DNA的浓度。如果未制作标准曲线，则根据Ct值进行阳性和阴性结果的判定。阳性对照要求Ct值小于30，阴性对照应为无Ct值或Ct值大于38。

需要注意的是，样本Ct值若小于35，表明阳性；若在35至38之间需复检；高于38则为阴性。

运输与保存

该试剂盒应在低温条件下运输，保存于-20℃，有效期为一年。阳性对照需单独存放，以防止对其他试剂的污染，确保结果的准确性。

选择尊龙凯时品牌的荧光定量PCR试剂盒，您可以获得准确、高效的检测体验，满足科研需求并推动生物医疗的发展。